最近有很多热心网友都十分关心农杆菌小摇和大摇的步骤，农杆菌摇菌转速及摇菌时间？？这个问题。还有一部分人想了解冻融法转化农杆菌步骤。对此，哈哈娱乐网小编「新不了情」收集了相关的教程，希望能给你带来帮助。

农杆菌怎么小摇和大摇

农杆菌小摇：在超净工作台中取无菌管，加入规定所需浓度的农杆菌菌液和培养液摇匀即可。农杆菌大摇：在合适量度的三角瓶中，加入规定所需浓度的农杆菌菌液和培养液，过夜摇菌。根据查询相关公开资料截止于2022年12月31日显示，方法如下；农杆菌小摇：在超净工作台中取无菌管，加入规定所需浓度的农杆菌菌液和培养液摇匀即可。农杆菌大摇：在合适量度的三角瓶中，加入规定所需浓度的农杆菌菌液和培养液，过夜摇菌。

农杆菌转化法的步骤

1、获取目的基因。用限制酶切割下目的基因。
2、基因表达载体的构建。将目的基因与载体（大多数选用质粒）用DNA连接酶连接起来。
3、将目的基因导入受体细胞。将含目的基因的重组质粒导入农杆菌（农杆菌为受体细胞）。
4、目的基因的检测与鉴定。用DNA分子杂交技术/分子杂交技术/抗原-抗体杂交/个体生物学水平鉴定（这个方法需要导入重组后的细胞的植物体，详见第五步） 几种方法进行检验（根据要求选取不同方法）。
5、最后将成功表达的细胞导入植物体内，对植物体进行个体生物学水平鉴定。

农杆菌转化的具体步骤是什么？

转化前一天将需要做转化的野生型拟南芥苗子浇水浇透。
于中午12点接菌于有YEP培养液的试管中10ul：10ml接种。28℃，3000rpm摇过夜，约30小时，次日下午6点将已摇活的菌按（1：400）及750ul菌液转至汉300毫升YEP+K50+Rif中培养28℃，300rpm约14小时，次日上午8点测OD值，用YEP+Rif作为空白对照，当菌液达到OD600为1.5~3.0之内时，可收集菌体于250ml离心瓶（灭菌）,4℃，4000g 离心10min 。用10%蔗糖（含0.02%silwet）稀释至OD600 约为0.8-- 1.0左右即，用10%蔗糖作对照。转化时将花在溶液中浸泡50s左右，于弱光下生长。

发根农杆菌划线培养的步骤

1、将发根农杆菌在YEB平板上划线培养。

2、挑取单菌落接种于20ml YEB液体培养基中，20℃，200rpm条件下振荡培养，至OD600值为0.6-0.8。

3、按1％量接种到新鲜的YEB或MS培养液(pH 5.4-5.8)中，需要时也可添加AS（100umol/L）。继续培养至OD值为0.2左右时，可直接用于接种。或当OD值为0.6-0.8时，将菌液转入无菌离心管中，4000rpm离心心5分钟。去除上清液，菌体用新鲜YEB或MS液体培养基稀释至OD值为0.2后用于侵染（需要时可加入100umol/L的AS）。4、用解剖刀从实生幼苗或试管幼苗顶端最幼嫩的节间处切除幼苗顶部。用无菌牙签从YEB平板上挑取少量细菌接种于切口表面，或用微量注射器吸取菌液，将菌液滴在伤口面，也可用针头刺入叶腋或茎、根的皮层分生组织内，接种极微量的菌液。处理后的实生苗用塑料袋套上，以防伤口干燥。

5、从实生幼苗或试管幼苗上剪取子叶、子叶柄、胚轴或叶片（叶片中是剪2－3个剪口）、叶柄、茎段（实生离体材料需经消毒处理）置无菌小培养皿中，加入适量菌液，轻轻摇动一下，浸泡1－10分钟（视具体材料而定）。取出置无菌滤纸上吸去多余的菌液，转入不含激素的MS培养基中进行共培养。

6、将处理后的植株及共培养材料置适宜条件下培养，2－4周后创口面或注射部位开始长出毛状根。

农杆菌摇菌转速及摇菌时间？

你的培养基抗性是什么？无抗的话200转28℃摇12h，这时OD可到0.8~1左右。12h之后每1h测量一次OD，直到你所需的OD=1。有抗生素的话摇16小时，然后按上面说的操作。

摇菌小摇和大摇时间分别多久

16、12小时。
1、摇菌的时间要求一般不是很严格，通常12－16小时，摇菌还分为大摇和小摇，大摇时间为16个小时，小摇时间为12个小时。
2、可以随时观察，看菌液变混浊了就差不多，然后依据混浊程度判断菌量的多少，越混浊菌越多，那么提出的质粒的量就越多，但也不是菌越多越好，如果太多，不能完全北裂解液裂解，反而会影响质粒的提取。

做水稻转化时，农杆菌挑取单菌落经PCR鉴定后为什么要接连摇菌两次？分别起什么作用？

第一次活化，第二次快速扩增。
补充农杆菌经平板划线复苏，然后挑点培养，再做PCR鉴定，有条带的就可用于第一次摇菌，过12个小时左右变浑浊的吸取一点进行第二次摇菌，这整个过程不是很明白，每一步的目的是什么，有什么作用？帮一下忙啊，谢谢啦！
补充划线挑单菌落是为了保证细菌的纯度。PCR鉴定保证是含有目的基因的阳性工程菌。前12个小时摇菌活化，第二次摇菌快速扩增直到达到需要的OD值为止。

摇菌的温度和转速

摇菌无抗可以200转，28℃摇12小时。这时OD可到0.8~1左右。12小时之后每1小时测量一次OD，直到你所需的OD=1。有抗生素的话摇16小时，然后依旧是按照上述操作。

在摇菌的时候一定要把握好时间和力度，至于需要多久，需要根据剂量来定，一般情况下如果采取标本越多的话，摇菌的时间就需要更长一些。

液体培养基的制作步骤 ：

1 称量 溶解：按配方称量药品，将药品置于烧杯中加水，玻璃棒搅匀。

2 分装：分装三角瓶时避免培养液黏住瓶壁口，用漏斗进行分装，三角瓶装料系数60％。

3 加棉塞：棉塞大小，松紧度要适中，一般塞入3-4厘米。

4 装锅灭菌：塞好棉塞的三角瓶用双层报纸包扎好，装入灭菌锅，盖上报纸，排气后，待温度升至121℃开始计时，温度控制在121—123℃，维持50min。

5 烘棉塞：当压力降至0.05MPa时带压进入无菌室，当压力即将降至零时开始放气，打开锅盖拿出报纸，将锅盖嵌一小缝，以此来烘干棉塞， 维持40—50min。

6 冷却：取出三角瓶放在超净工作台或接种箱中，冷却后进行接种。

摇大肠杆菌培养为什么分小摇和大摇

您好！微生物试验培养放大一般强调单一菌落来源，这样是为了保证样品的均一性。所以还是应该挑1个单菌落于50ml的液体培养基中小锥形瓶中，然后将这1瓶中的分到4个200ml的大锥形瓶中。

百度教育团队【海纳百川团】为您解答。
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